近万例样本Target Cap®捕获技术表现
- boke
- 2022-05-09
- 9:00 下午
近几十年来,许多转基因作物已被开发并批准用于植物和植物加工产品,通过更高的产量、更有效地利用自然资源和减少化肥和农药的使用获得经济和环境效益。转基因作物风险评估的方法必须是全面的,包括分子特征和食品与环境安全。在风险评估中,需要在染色体水平上进行全面的分子特征分析,包括整合的位置和DNA序列,DNA插入和侧翼序列,以及载体序列残留,为生物安全评估提供关键数据。
目前还没有有效的方法来破译转基因整合方式,尤其是对于具有复杂重排、反转和串联重复的大片段DNA整合。因此,研究人员开发了一种靶向PacBio测序(LIFE-Seq)方法,用于破译转基因生物中的转基因整合。该方法结合了液相基因芯片技术和长读长测序的优势,针对转基因元件和外源基因序列设计“通用DNA探针”,与大片段文库(~6Kb,脉冲场电泳分选)进行杂交捕获,对植物基因组转基因相关的插入DNA片段进行特异性富集,然后进行PacBio测序。
图1. LIFE-Seq Workflow
与全基因组测序相比,LIFE-Seq实现了更好的数据完整性和准确性、更大的通用性和更低的成本,尤其是对于具有复杂插入DNA结构的转基因作物。LIFE-Seq可用于转基因作物和动物的分子鉴定,以及遗传学研究中复杂的DNA结构分析。
图2. 玉米和大豆材料中T-DNA插入位点鉴定